蟾蜍靈（bufalin）是中藥蟾酥中的主要成分之一，研究表明其可誘導(dǎo)多種肝ai細(xì)胞自噬。蟾蜍靈可激huo肝aiHepG2細(xì)胞自噬和凋亡，增強(qiáng)自噬Beclin-1（BECN-1）的表達(dá)，促進(jìn)I型微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3-I）向II型微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3-II）的轉(zhuǎn)化，抑制p62和mTOR信號(hào)通路表達(dá)，AMPK抑制劑可降低蟾蜍靈誘導(dǎo)自噬的作用，提示蟾蜍靈誘導(dǎo)的自噬作用可能是AMPK-mTOR依賴性的。蟾蜍靈可通過抑制Akt/mTOR通路，上調(diào)LC3-II、Beclin-1、Atg5、Atg7和Atg12蛋白的量，誘導(dǎo)SK-HEP-1細(xì)胞自噬性死亡。此外，蟾蜍靈還可誘導(dǎo)Huh7、Hep3B和HA22T細(xì)胞自噬，抑制細(xì)胞增殖，使細(xì)胞阻滯在G2/M期，其誘導(dǎo)自噬的機(jī)制可能與激huoJNK通路，上調(diào)中流壞死因子（TNF）、BECN-1、Atg8水平相關(guān)。細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的增加和線粒體膜電位的減少也能誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的發(fā)生。杭州自噬

自噬發(fā)生過程：在此過程中，自噬體的形成是關(guān)鍵，其直徑一般為300~900nm，平均500nm，囊泡內(nèi)常見的包含物有胞質(zhì)成分和某些細(xì)胞器如線粒體、內(nèi)吞體、過氧化物酶體等。與其他細(xì)胞器相比，自噬體的半衰期比較短，只有8min左右，說明自噬是細(xì)胞對(duì)于環(huán)境變化的有效反應(yīng)。在整個(gè)自體吞噬過程中,細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器都受到破壞,較明顯的是線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受損。雖然自體吞噬并不直接破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞核,但是有證據(jù)表明,在較初斷裂或消化后,細(xì)胞膜和細(xì)胞核會(huì)然后變成溶酶體以消化和分解自身。杭州自噬誘導(dǎo)與吞噬泡形成：為應(yīng)對(duì)多種刺激，通過形成一種獨(dú)特的平整細(xì)胞膜（吞噬泡）誘導(dǎo)自噬。

2005年，Lemaster提出線粒體自噬的概念:細(xì)胞利用自噬活動(dòng)的選擇性，通過自噬溶酶體清chu細(xì)胞內(nèi)衰老、損傷或功能障礙的線粒體，維持細(xì)胞內(nèi)線粒體質(zhì)量和數(shù)量的穩(wěn)定。線粒體自噬是一種選擇性自噬現(xiàn)象，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)，與細(xì)胞發(fā)揮正常功能密切相關(guān)。近年來，線粒體自噬在肝臟疾病、糖尿病、心血管疾病、帕金森綜合征等疾病中的研究取得了突破性進(jìn)展。線粒體自噬是復(fù)雜的生理過程，在不同細(xì)胞中有多種誘導(dǎo)和調(diào)控機(jī)制，如酵母中的自噬相關(guān)基因(autopahgyrelatedgenes，Atg)家族蛋白誘導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制及網(wǎng)織紅細(xì)胞中NIX(Nip3-likeproteinX)介導(dǎo)的線粒體自噬機(jī)制等。

自噬雙標(biāo)系統(tǒng)的工作原理為：未發(fā)生自噬的細(xì)胞及含有自噬體的細(xì)胞中，由于mCherry與GFP共同表達(dá)，細(xì)胞呈現(xiàn)黃色熒光。當(dāng)自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體后，酸性的溶酶體環(huán)境使酸敏感的GFP熒光淬滅，而mCherry不受影響，進(jìn)而使自噬溶酶體呈現(xiàn)紅色熒光。因此，紅色熒光可指示自噬溶酶體形成的順利程度。紅色熒光越多，綠色熒光越少，則從自噬體到自噬溶酶體階段流通得越順暢。反之，自噬體和溶酶體融合被阻止，自噬溶酶體進(jìn)程受阻。自噬阻止劑可以通過阻止自噬通路中的某種蛋白來實(shí)現(xiàn)阻止自噬，也可以通過直接擾亂溶酶體功能來阻止自噬。

自噬是一系列自噬體結(jié)構(gòu)演變的過程，由自噬相關(guān)基因(autophagy-relatedgene,ATG)執(zhí)行精細(xì)的調(diào)控。在饑餓、低氧、藥物等因素作用下，待降解的細(xì)胞成分周圍會(huì)形成雙層結(jié)構(gòu)分隔膜，隨后分隔膜逐漸延伸，較終將待降解的胞漿成分完全封閉形成自噬體(autophosome)；自噬體形成后將通過細(xì)胞骨架微管系統(tǒng)運(yùn)輸至溶酶體，二者融合形成自噬溶酶體(autopholysome)；較終其內(nèi)容物在溶酶體酶作用下被細(xì)胞降解利用。目前研究發(fā)現(xiàn)自噬調(diào)節(jié)涉及多種信號(hào)通路，其中以腺苷單磷酸活化蛋白激酶(adenosinemono-phosphateactivatedproteinkinase,AMPK)及哺乳動(dòng)物雷帕霉素受體(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)信號(hào)通路為調(diào)控中心。AMPK促進(jìn)自噬發(fā)生，而mTOR阻止自噬發(fā)生。此外，許多經(jīng)典的凋亡信號(hào)通路或蛋白被發(fā)現(xiàn)與自噬調(diào)控之間存在著復(fù)雜的交織。L-NAME抑制NO產(chǎn)生能活化自噬, 促進(jìn)突變Htt 降解并減輕聚集突變蛋白的毒性作用。杭州自噬

融合、降解與回收：完全形成的自噬體與溶酶體在細(xì)胞內(nèi)相融合。杭州自噬

自噬在病變發(fā)生的不同階段扮演了完全不同的角色。作為正常細(xì)胞生命活動(dòng)所必需的一種過程，自噬水平低下可導(dǎo)致細(xì)胞病變。例如，在胃病和結(jié)腸病等病變細(xì)胞中，經(jīng)?？捎^察到和Beclin-1密切相關(guān)的蛋白BIF-1突變或缺失，而Beclin-1是自噬信號(hào)通路中的一種關(guān)鍵蛋白。在小鼠模型中，敲除自噬相關(guān)蛋白Atg7和Atg5可誘發(fā)肝病。進(jìn)一步研究表明，自噬可以清理受損線粒體，從而避免受損線粒體產(chǎn)生大量活性氧，而活性氧可以對(duì)DNA等遺傳物質(zhì)造成損傷進(jìn)而致病。從這個(gè)角度來說，在一些病變發(fā)生的早期，促進(jìn)自噬可能是一條可行的抗病變途徑。杭州自噬