MSI-H結直腸ai的比例(22％)高于Ⅲ期結直腸ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H結直腸ai發(fā)生轉移的風險較低。特別是在Ⅱ期結直腸ai患者中，MSI狀態(tài)是提示預后的**預測因子，MSI-Hliu預后好于MSSliu。Ⅱ期結直腸ai復發(fā)的高危因素包括：liu組織學類型為低分化ai、有脈管／神經(jīng)侵犯、淋巴結檢出數(shù)量不足12個、發(fā)生梗阻或穿孔以及切緣陽性，但如liu為MSI-H型，則低分化不屬高危因素。2．指導***：研究發(fā)現(xiàn)，MSI-H結直腸ai對5-氟尿嘧啶和順鉑等化療藥物不敏感，而對伊立替康等化療藥物敏感，同時MSI結直腸ai對放療比較敏感。美國國立綜合ai癥網(wǎng)絡(NCCN)的結直腸ai臨床實踐指南明確指出，對MSI-H結直腸ai不宜采用5-氟尿嘧啶和鉑類為主的***方案。3．Lynch綜合征患者篩查：Lynch綜合征患者較常見同時性或異時性多發(fā)結直腸ai，如果術前能明確Lynch綜合征的診斷，外科醫(yī)師有可能采取更為***的切除術式。Lynch綜合征患者不*發(fā)生結直腸ai的風險增高，而且可以發(fā)生子宮內膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多種腸外惡性liu，有研究表明，阿司匹林能夠預防Lynch綜合征相關結直腸ai及腸外liu的發(fā)生。由于Lynch綜合征與大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。邁杰轉化醫(yī)學與全球品牌藥企廣f泛展開伴隨診斷產(chǎn)品的開發(fā)合作，已有多個診斷產(chǎn)品上市。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦

    atccnumbercrl-8287)以5:1比例混合，離心1500rpm，5min。棄上清后離心管放入37℃水浴中，在1分鐘內緩慢加入1ml的peg1500(roche公司)，并攪動細胞。在溫水中靜置1min后，加入10ml無血清的imdm(sigma公司)，混勻，離心1000rpm，5min。棄上清后，加入10ml血清(paa公司)小心的將細胞吹打起來，并加入5ml混合10xhat(sigma公司)的胸腺細胞，混勻。再加入25ml含有％硝基纖維素(sigma公司)的半固體培養(yǎng)基充分混勻，然后均勻的倒入20個細胞培養(yǎng)皿中。將細胞培養(yǎng)皿放入到濕盒中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。三、克隆化及elisa篩選陽性雜交瘤細胞：融合后11天，克隆細胞團大小密度適中，在解剖鏡下，吸取圓、實、大的克隆團(10板×93個)打入事先準備好培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3天后，細胞量大約占底面積2/3，取100μl上清進行elisa篩選。陽性克隆完全換液，加入200μl含飼養(yǎng)細胞和1％ht(sigma公司)的完全培養(yǎng)基。兩天后進行第二次elisa篩選，陽性克隆轉入事先準備好培養(yǎng)基(含飼養(yǎng)細胞和ht)的24孔板培養(yǎng)。五天后取100μl上清進行第三次elisa篩選，陽性克隆逐次轉入6孔板和細胞培養(yǎng)瓶擴大培養(yǎng)并凍存。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦【邁杰轉化醫(yī)學】開發(fā)的dMMR抗體檢測試劑,檢測費用低,技術成熟,臨床易開展。

    將培養(yǎng)的菌液轉接到500mllb液體培養(yǎng)基混合，37℃，200rpm，培養(yǎng)至od＝，iptg()低溫過夜誘導。400ml大離心筒，6000rpm，離心5min收集菌體，棄上清。沉淀用20-30ml10mmtris-hcl()和終濃度為，超聲破碎菌體。12000rpm離心20分鐘，取離心上清上樣到ni-nta鎳柱(qiagen)進行純化，之后分別用含15mm咪唑、60mm咪唑、300mm咪唑的10mmtris-hcl()(含)溶液洗脫，分別收集蛋白峰，電泳檢測，備用；所制備的重組蛋白，蛋白濃度為，純度為80％。圖1為純化后重組msh6蛋白的電泳結果圖,其中m：分子量標記、1：：、實施例2abm58060-20a2-pu雜交瘤細胞系的建立一、免疫將實施例1中的重組蛋白用弗氏完全佐劑(sigma公司，f5881)乳化，免疫icr小鼠(購自北京維通利華實驗動物技術有限公司)，腹部皮下注射每只小鼠6點，劑量為60μg/只。每14天加強免疫一次，抗原使用弗氏非完全佐劑(sigma公司，f5506)乳化，劑量為30μg/只。第3次加強免疫后7天，msh6-1蛋白，2ug/ml，4℃包被過夜，elisa檢測小鼠血清中抗免疫原的多抗效價，效價比較高的小鼠以尾靜脈注射沖擊免疫，抗原用生理鹽水混勻，劑量為50μg/只。二、細胞融合：無菌制備免疫達標的小鼠脾細胞懸液，與小鼠骨髓瘤細胞sp2/0。

    微衛(wèi)星不穩(wěn)定），不推薦氟尿嘧啶類藥物的單藥輔助化療。四、PIK3CA/PIK3CB磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）是PI3K/AKT信號通路中的關鍵分子，PIK3CA/PIK3CB為PI3K的亞單位，研究表明其表達異常導致PI3K/AKT細胞信號通路的異常，在結直腸ai的發(fā)***展中有重要的作用，其還與MDR1、MRP1介導的多藥耐藥存在密切聯(lián)系。1.預測西妥昔單抗療效有多項臨床回顧性研究證明PIK3CA基因突變狀態(tài)與西妥昔單抗的療效密切相關，PIK3CA基因突變的患者，西妥昔單抗療效低，反之療效高，但PI3KCA在西妥昔單抗靶向***大腸ai中的具體調控機制尚不清楚。2.評估預后2014年KishikiT等發(fā)現(xiàn)在KRAS野生型的結直腸ai患者中，攜帶PIK3CA突變的患者疾病控制率較低，PFS較野生型患者短（HR：；95%CI：；P＜），OS也較野生型短（HR：；95%CI：；P＜）。另外一項發(fā)表在JCancerResClinOncol對839名接受抗EGFR***的mCRC病人的Meta分析研究發(fā)現(xiàn)，攜帶PIK3CA突變的患者PFS更短。因此PIK3CA與大腸ai發(fā)***展及多藥耐藥性具有密切關系，其高表達不*會導致傳統(tǒng)化療耐藥，并且與EGFR靶向***密切相關。其高表但仍有許多難題有待克服，特別是針對PIK3CA、PIK3CB突變、耐藥等機制的研究。邁杰多平臺的研究優(yōu)勢以及多組學數(shù)據(jù)的挖掘能力，促進產(chǎn)學研醫(yī)結合，加速項目成果轉化，創(chuàng)新科技產(chǎn)品研發(fā)。

    目前較常使用的檢測技術為聚合酶鏈反應（PCR）和免疫組化（IHC）檢測[4]。PCR檢測，目前公認的標志物套餐由BAT25、BAT26、NR21、NR24、NR22或NR27組成。當檢測的微衛(wèi)星標志物中沒有發(fā)現(xiàn)異常，標本定義為微衛(wèi)星穩(wěn)定性（MSS）；如果有一個標志物或低于40%的標志物顯示異常，則標本被認定為低水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI-L)；當測試標志物的40%或超過40%異常時，標本被認定為高水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI-H）。免疫組化檢測，建議使用PMS2、MSH6、MLH1和MSH2的抗體套餐來檢測MSI現(xiàn)象。判讀標準如下：在對照組織（即liu周圍的正常上皮細胞、liu內浸潤的淋巴細胞、間質細胞均出現(xiàn)細胞核著色）中----強陽性表達的前提下，只要MMR蛋白在liu細胞出現(xiàn)核著色（），即判定該蛋白為陽性表達；若MMR蛋白在liu細胞未出現(xiàn)核著色現(xiàn)象（—）則視為MMR蛋白缺失[5,6]。當四個錯配修復蛋白均表達時，可判定為MSS；當四個錯配修復蛋白中只有一個發(fā)生表達缺失時，可判定為MSI-L；當四個錯配修復蛋白2個或以上表達缺失時，可判定為MSI-H。已確定4種MMR蛋白對MSI-H的敏感性、特異性均接近100%。4林奇綜合征（Lynch綜合征）的發(fā)病機制和臨床特征林奇綜合征是指因錯配修復基因。邁杰轉化醫(yī)學針對藥物研發(fā)過程中靶點、適應癥及PD研究中生物標志物等研究的進行方案開發(fā)設計。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦

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    發(fā)明人還提供上述任一所述的抗msh6蛋白單克隆抗體，在msh6蛋白免疫檢測中的用途。進一步地，所述免疫檢測包括免疫組織化學法，免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法。區(qū)別于現(xiàn)有技術，上述技術方案依據(jù)msh6蛋白、抗原性、組成氨基酸的親疏水性以及二級結構，選擇msh6蛋白第1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達,其dna編碼序列為seqid**,用大腸桿菌進行表達，得到免疫原。對小鼠進行免疫，經(jīng)細胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗msh6蛋白單克隆抗體的單克隆細胞系abm58060-20a2-pu,以及由該細胞系所分泌的抗msh6蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達msh6蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測?；旧Y果圖(左為abm58060-20a2-pu分泌的msh6，右為市售msh6)。具體實施方式實施例1重組msh6蛋白片段的制備一、抗原片段選擇依據(jù)uniprot中登錄號為p52701的蛋白質序列進行序列和二級結構分析，全長為1360個氨基酸長度的msh6蛋白含有muts超家族區(qū)域，其分子量約為152kda左右，依據(jù)通過在線服務器測的蛋白的二級結構(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)參數(shù)，并通過對其抗原性指數(shù)(jamesonba,:(1):181-6.)的分析結果。黑龍江作用dMMR抗體檢測試劑口碑推薦